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乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒,LDH試劑盒

更新時(shí)間:2018-07-24      瀏覽次數(shù):947

乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒,LDH試劑盒

上海信帆生物為您提供乳酸脫氫酶試劑盒說(shuō)明書,提供乳酸脫氫酶實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù),歡迎大家前來(lái)咨詢!


乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)幾乎存在于所有組織中,以心、骨骼肌和腎臟豐富,其次為肝、脾、胰腺、腦、肺臟等。采用電泳法可將人組織中的乳酸脫氫酶同工酶分離出5種同工酶區(qū)帶,根據(jù)其電泳遷移率的快慢,依次為L(zhǎng)DH-1、LDH-2、LDH-3、LDH-4、LDH-5。乳酸脫氫酶同工酶分布存在明顯的特異性,可用于心肌疾病的診斷。
 

乳酸脫氫酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)試劑盒說(shuō)明書
 

分光光度法
 

規(guī)格:50 管/24 樣
 

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:30mL×1 瓶, 4℃保存;

試劑一:液體 15 mL×1 瓶, 4℃保存;

試劑二:粉劑×1 支,-20℃保存,用時(shí)加入 1.3 mL 雙蒸水充分溶解備用,配好后-20 ℃保存,可保存兩周,禁

止反復(fù)凍融;

試劑三:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:液體 50 mL×1 瓶,4℃保存;

乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒,LDH試劑盒

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與

乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著 NAD+

/NADH 之間互變。

LDH 催化 NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿

性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:

可見分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
 

操作步驟:

一、樣品測(cè)定的準(zhǔn)備:

1. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(10

4個(gè)):提取液體積

(mL)為 500-1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,

功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次),8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5-10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),

進(jìn)行冰浴勻漿;8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

3. 血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
 

二、測(cè)定操作:

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 450nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 樣本測(cè)定(在 EP 管中加入下列試劑)

試劑名稱(μL) 測(cè)定管 對(duì)照管

樣本 50 50

試劑一 250 250

試劑二 50

蒸餾水 50

充分混勻,37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)水浴 15min

試劑三 250 250

充分混勻,37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)水浴 15min

試劑四 750 750

充分混勻,室溫靜置 3min,450 nm 下測(cè)定吸光度,計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管需要設(shè)一個(gè)對(duì)

照管。
 

LDH 活力單位計(jì)算:

1. 標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸曲線, y = 0.725x (x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度,μmol/mL;y 為對(duì)吸光度)。

2. 血清(漿)LDH 活力的計(jì)算

單位的定義:每 mL 血清(漿)每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH(U/mL)=ΔA÷0.725÷T×10

3=92×ΔA
 

3. 細(xì)胞、細(xì)菌和組織中 LDH 活力的計(jì)算

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH(U/mg prot)=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (V1×Cpr) ÷T×10

3 =92×ΔA÷Cpr

需要另外測(cè)定,建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測(cè)定試劑盒。

(2) 按樣本鮮重計(jì)算:

單位的定義:每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH(U/g 鮮重)=[ΔA÷0.725×V 1] ÷ (W ×V1÷V2) ÷T×10

3 =92×ΔA÷W
 

(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:

單位的定義:每 1 萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1nmol 丙酮酸定義為一個(gè)酶活力單位。

LDH(U/10

4 cell)= [ΔA÷0.725×V 1]÷(500 ×V1÷V2) ÷T×10

3 =0.184×ΔA÷W

V1:加入反應(yīng)體系中樣本的體積,0.05 mL;V2:加入提取液的體積,1 mL; T:反應(yīng)時(shí)間,15 min;Cpr:

蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品質(zhì)量,g; 500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬(wàn)。

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