乳酸脫氫酶試劑盒測(cè)定原理

測(cè)定原理：

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

試劑的組成和配制：

提取液：60mL×1 瓶， 4℃保存；

試劑一：液體 5 mL×1 瓶， 4℃保存；

試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存，用時(shí)加入 10μL 試劑五和 1.3 mL 蒸餾水充分溶解備用，用

不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融；

試劑三：液體 5 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：液體 20 mL×1 瓶，4℃保存；

試劑五：液體 100μL×1 支，4℃保存；

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備：

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

（104個(gè)）：提取液體積（mL）為 1000~5000：1 的比例（建議 2000 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30

次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，

加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

相關(guān)文獻(xiàn)支持：

文章標(biāo)題《丙泊酚介導(dǎo)細(xì)胞自噬及Nrf2信號(hào)通路對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用》

摘要：目的:探討丙泊酚介導(dǎo)細(xì)胞自噬及Nrf2信號(hào)通路對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。方法:將60只SPF級(jí)雄性SD大鼠分為假手術(shù)組、模型組和丙泊酚組,每組各20只。采用結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支法制備MI/RI損傷模型（缺血30 min,再灌注2 h）;丙泊酚組心肌缺血前15 min給予靜脈輸注丙泊酚6 mg•kg-1•h-1至再灌注2 h,假手術(shù)組和模型組靜脈輸注生理鹽水3 mL•kg-1•h-1,再灌注2 h。使用超聲心動(dòng)圖觀察大鼠心臟功能,ELISA法檢測(cè)心肌損傷標(biāo)志物和心肌組織氧化應(yīng)激因子水平,HE染色觀察各組大鼠心肌組織病理變化,Western blot檢測(cè)心肌組織中自噬和核轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）信號(hào)通路相關(guān)蛋白水平。結(jié)果:LVEF、FS、LVWT、HR和LVSP水平等心功能指標(biāo)在模型組、假手術(shù)組和丙泊酚組的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。模型組CK-Mb、Mb和cTnI水平高于假手術(shù)組（P<0.05）,丙泊酚組低于模型組（P<0.05）;