BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒使用原理

產(chǎn)品介紹：

BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒的原理是蛋白質(zhì)分子中肽鍵結(jié)構(gòu)在堿性環(huán)境下能與Cu2+生產(chǎn)絡(luò)合物,并將Cu2+還原成Cu+,而BCA試劑可以特異性地與Cu+結(jié)合,形成穩(wěn)定的有顏色的復(fù)合物,并在562nm處有最大的光吸收值,該復(fù)合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度成正比,可以根據(jù)吸收值的大小來(lái)測(cè)定蛋白的含量。

產(chǎn)品名稱：BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒

規(guī)格：500T

儲(chǔ)存條件：室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20℃凍存。

微孔板測(cè)定程序：（工作范圍50-2000 μg/ml）

1、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品配制：室溫完全溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,取20µl 5mg/ml BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液用PBS溶液稀釋至100µl,使其終濃度為1.0 mg/ml。

2、配制BSA標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定溶液 。 

3、將適當(dāng)體積的待測(cè)樣品加入到微孔板中,并用PBS補(bǔ)足到20 µl

4、向微孔板中加入200 μl BCA工作液,混勻,37℃放置30分鐘；

注：也可以室溫放置2小時(shí),或60℃放置30分鐘。BCA法測(cè)定蛋白濃度時(shí),顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深,并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高而加快。如果濃度較低,適合在較高溫度孵育,或適當(dāng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。

5、測(cè)定562 nm 處的吸光值,并記錄讀數(shù)；以不含BSA 的樣品的光吸收值作為空白對(duì)照。

6、以A562為縱坐標(biāo),BSA含量為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算樣品中的蛋白濃度。如果所得到的蛋白濃度不在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),請(qǐng)稀釋樣品后重新測(cè)定。

試管測(cè)定程序：（工作范圍50-1000 μg/ml）

1、蛋白標(biāo)準(zhǔn)品配制：室溫完全溶解蛋白標(biāo)準(zhǔn)品,取150µl 5mg/ml BSA蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液,加入600μl PBS溶液稀釋至750µl,使其終濃度為1.0 mg/ml。

2、配制BSA標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定溶液。

3、將適當(dāng)體積的待測(cè)樣品加入到試管中,并用PBS補(bǔ)足到100 µl；

4、向試管中加入2ml BCA工作液,混勻,37℃放置30分鐘；

5、6步驟同上。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、靈敏度高,檢測(cè)濃度下限達(dá)到25µg/ml（在50-1000μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系）,最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5μg,待測(cè)樣品體積為1-20μl。

2、BCA法測(cè)定蛋白濃度的最大優(yōu)點(diǎn)是蛋白濃度的測(cè)定可以耐受高濃度的去垢劑,可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20, 60, 80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響,需確保EDTA低于10mM,無(wú)EGTA,二硫蘇糖醇低于1mM,β-巰基乙醇低于0.01%。 

注意事項(xiàng)：

1、本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途。

2、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。