硝態(tài)氮檢測(cè)試劑盒(磺胺微板法)的操作步驟

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

硝態(tài)氮是植物最主要的氮源，植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量反映了土壤中硝態(tài)氮的供應(yīng)情況，可作為土壤氮肥的指標(biāo)，測(cè)定植物體內(nèi)的硝態(tài)氮含量,不僅能夠反映出植物的氮素營(yíng)養(yǎng)情況，而且對(duì)鑒定蔬菜和以植物為原料的加工制品的品質(zhì)也有重要的意義。硝態(tài)氮檢測(cè)試劑盒(磺胺微板法)檢測(cè)原理是還原劑將硝酸根還原成亞硝酸根后，與對(duì)氨基苯磺酸和萘胺結(jié)合，形成玫瑰紅色的偶氮化合物，其顏色深淺與氮含量在一定范圍內(nèi)呈正比，以酶標(biāo)儀測(cè)定 520nm 處吸光度，根據(jù)硝態(tài)氮的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣品的硝態(tài)氮含量，主要用于測(cè)定植物組織、血清、組織樣本等的硝態(tài)氮含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。 

操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取正?；蚰婢诚碌男迈r植物組織 0.1~0.15g，清洗干凈，擦干，剪碎成

1~2mm 的碎片，加入 4ml 硝態(tài)氮提取液，劇烈振蕩 2~4min，靜置澄清后，上清液即

為硝態(tài)氮提取液，4℃保存?zhèn)溆谩?/span>

②血清和尿液樣品：按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測(cè)定，4℃保存，用于

硝態(tài)氮的檢測(cè)。

③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的硝態(tài)氮，可以使用硝態(tài)氮提取液或蒸餾水進(jìn)

行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、配制系列硝態(tài)氮標(biāo)準(zhǔn)溶液：取硝態(tài)氮標(biāo)準(zhǔn)(200μg/ml)用蒸餾水稀釋至 20μg/ml。

3、加樣：按照下表設(shè)置空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、測(cè)定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免

產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的硝態(tài)氮濃度過(guò)高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，樣品的檢測(cè)最好能設(shè)置平行管。

4、硝態(tài)氮測(cè)定：劇烈振蕩 1min，靜置 10min，用雙層濾紙過(guò)濾至新的離心管中，4000rpm

離心 5min，取上清液再次離心，取上清液加入 96 孔板中，以蒸餾水做對(duì)照調(diào)零，酶標(biāo)

儀 520nm 處測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)孔、測(cè)定孔吸光度(記為 A 標(biāo)準(zhǔn)、A 測(cè)定)。

計(jì)算：

以系列硝態(tài)氮標(biāo)準(zhǔn)(1~7 號(hào)管)濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測(cè)定孔的吸光-度計(jì)算出樣品硝態(tài)氮的含量。根據(jù)如下公式計(jì)算具體樣品中硝態(tài)氮的含量：

植物組織樣品硝態(tài)氮(μg/g)=C×V/m

式中：C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的樣品的硝態(tài)氮濃度(μg/ml)

V=樣品提取液的總體積(ml)，本法中為 4ml

m=樣品的質(zhì)量(g)

血清、尿液等樣品硝態(tài)氮(μg/ml)=C×N

式中：C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的樣品的硝態(tài)氮濃度(μg/ml)

N=稀釋倍數(shù)

注意事項(xiàng)：

1、 實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即測(cè)定，應(yīng)存于 4℃。

2、 Assay Buffer 易揮發(fā)，請(qǐng)密閉保存。

3、 如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定。

4、 所測(cè)樣品的濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)用硝態(tài)氮提取液或蒸餾水稀釋樣品后重新測(cè)定。

5、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：12 個(gè)月有效。

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