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土壤硝酸還原酶（Solid-Nitrate Reductase，S-NR）試劑盒說明書

測定意義

S-NR催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，是土壤硝態(tài)氮還原的關(guān)鍵酶。研究S-NR的活性對合理施肥，降低氮素的損失具有重要意義。

測定原理

S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO3ˉ +NADH+H^＋→ NO2ˉ +NAD＋ +H 2 O；產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下，與對–氨基苯磺酸及 α - 萘胺定量生成紅色偶氮化合物；生成的紅色偶氮化合物在 540 nm 有zui大吸收峰，可用分光光度法測定。

土壤硝酸還原酶試劑盒

需自備的儀器和用品

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一：液體20mL×1瓶，-20℃保存。

試劑二：液體10mL×1瓶，-20℃保存。

試劑三：液體25mL×1瓶，4℃保存。

試劑四：液體25mL×1瓶，4℃保存。    

試劑五：標(biāo)準(zhǔn)品儲備液1mL，-20℃保存。

0.1mmol/L的NaNO₂標(biāo)準(zhǔn)液的配制：用時將試劑五稀釋100倍，即取 0.1ml 加蒸餾水定容至 10ml。

測定操作表

      混勻后，蓋蓋后37℃水浴60min，8000g室溫離心10min，取上清液

混勻，顯色20min后，4000g，室溫離心10min，用蒸餾水調(diào)零，540nm下讀取各管吸光值

注意事項(xiàng)

1、試劑一、試劑二和試劑五在冰上放置，用完立即放回-20℃。

2、標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測一次。每個測定管設(shè)一個對照管。

S-NR活性計(jì)算：

單位的定義：24h每g土樣中產(chǎn)生1μmol NO₂^ˉ的量為一個 S-NR活力單位。

S-NR（U/g）=標(biāo)準(zhǔn)品濃度（0.1mmol/L）×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷反應(yīng)時間（1/24h）×反應(yīng)總體積（0.5mL）÷樣本質(zhì)量（0.1g）=12×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）

土壤硝酸還原酶試劑盒