上海信帆生物：10月WB實驗代測*開始啦！

凡是10月代做WB實驗的客戶，均可以享受75折優(yōu)惠（包含一抗和所以試劑），客戶自己提供一抗更可以享受7折優(yōu)惠。歡迎大家。

Western Blot技術服務，WB免疫印跡，WB實驗代測，代測時間為1到2周，提供原始數(shù)據(jù)，分析數(shù)據(jù)，圖片和實驗報告。客戶僅需提供樣本即可，其余所有試劑均由我司來提供，樣本所需大小為黃豆粒大小，請有EP管包好，寄送樣本用泡沫盒子放干冰或者冰袋運輸。歡迎大家。

上海信帆代做實驗項目:ELISA,免疫組化,免疫印跡Western Blot,放射免疫,實時熒光定量ＰＣＲ,特殊染色,病理學檢測技術服務等等!我們擁有的實驗室,客戶檢測項目均提供實驗室儀器型號,提供操作詳細步驟.歡迎!
Western Blot實驗
Western Blot技術服務，WB免疫印跡，WB實驗代測

成功完成Western Blot檢測，必須滿足4個條件：

凝膠洗脫：轉移期間蛋白質必須從凝膠中洗脫出來，如果蛋白質還截留在凝膠中，將無法在膜上進行分析

吸附到膜上：在轉移過程中蛋白質必須吸附到膜上，如果蛋白不吸附，將無法在膜上進行分析

處理期間仍截留在膜上：在轉移后的處理過程中蛋白質必須保持吸附在印跡膜上

處理過程中可接近：被吸附的蛋白質必須能夠與檢測試劑接觸，如果蛋白質被掩蓋則無法檢測

成功進行WB檢測，則設置合適正確的對照是*的，只要正確設置了這些對照，即可快速和準確的找到WB的問題所在，并保證實驗結果的準確性和特異性！一般需要設置的對照如下：

陽性對照：明確表達檢測蛋白的組織或細胞，用于檢測抗體的工作效率

陰性對照：明確不表達檢測蛋白組織或細胞，用于檢測抗體的特異性

二抗對照：不加一抗，用于檢測二抗的特異性

內參對照：檢測標本的質量和二抗系統(tǒng)

空白對照：不加一抗和二抗；用于檢測膜的性質和封閉的效果 

WB 檢測基本過程 

1 、獲取細胞或組織裂解物 

1）根據(jù)檢測蛋白的位置選擇合適的裂解buffer：
 
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亦可購買商業(yè)化的蛋白提取試劑盒來保證標本制備的質量

2）選擇合適的蛋白酶抑制劑，避免蛋白降解，從而保證檢測的準確性！

2 、蛋白定量 

常用的蛋白定量方法：Bradford assay, Lowry assay 或BCA assay。定量后，可根據(jù)情況將標本保存在-20°C /-80°C備用，進行免疫沉淀（IP）或者直接進行電泳分離蛋白

3 、電泳分離蛋白質 

根據(jù)待測蛋白狀態(tài)確定電泳條件： 
 

根據(jù)待測蛋白分子量大小確定凝膠濃度
 

4 、轉膜 

根據(jù)不同的檢測目的和待測蛋白的特性,選擇合適的膜類型。常用的轉移膜類型有:PVDF膜、硝酸纖維素膜（NC膜）和尼龍膜，其中PVDF和NC膜的使用頻率。各種膜的技術參數(shù)及比較如下：
 

5 、封閉 

去掉膜上多余的非特異性結合位點，降低背景。常用的封閉溶液有：含BSA或者脫脂奶粉的TBST或TBS

6 、一抗孵育 

一抗的選擇成功與否，是整個WB實驗成功的關鍵：選擇一抗有以下幾個注意點：

選擇適合檢測標本種屬的一抗（說明書有驗證）

選擇適用于WB實驗方法的一抗（說明書有驗證）

選擇單克隆抗體或者經(jīng)過親和純化的多克隆抗體

一抗的保存和使用：

根據(jù)說明書的要求條件進行抗體的保存；一般需要將抗體分裝后放入-20度保存，避免反復凍融。

抗體的工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，在4度保存不要超過2周

根據(jù)說明書推薦濃度使用TBST稀釋一抗。由于實驗室條件和檢測方法等的差異，說明書推薦的稀釋比例只作參考，需要在說明書推薦的濃度周邊進行多個濃度梯度的實驗檢測，然后選擇信噪比的抗體濃度進行實驗。如果說明書沒有推薦濃度，可進行多個稀釋比例進行摸索一般稀釋度（1:100-1:3000）。

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