Dispase中性蛋白酶

Dispase中文名稱為中性蛋白酶，也稱為分散酶，是一種非特異性的金屬蛋白酶，被用來從各種不同組織或器官中消化細(xì)胞外基質(zhì)，釋放并制備原代單細(xì)胞；或用于細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞收獲或接種轉(zhuǎn)移；也被用于防止懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的細(xì)胞意外結(jié)團(tuán)。

蛋白水解酶類，如胰蛋白酶、膠原酶和鏈酶蛋白酶都被用語來分散組織、分類細(xì)胞，但他們常傷害細(xì)胞，并且在培養(yǎng)時(shí)不穩(wěn)定，甚至可能引入支原體污染。Dispase就沒有這個(gè)問題，不會(huì)給細(xì)胞膜帶來傷害，而且因?yàn)槠鋪碜约?xì)菌，故不會(huì)引入支原體或任何動(dòng)物病毒；溫度、pH、血清成分等的差異對(duì)Dispase影響很小。Dispase經(jīng)稀釋后其活性就大大降低，這也方便了后續(xù)的培養(yǎng)。Dispase甚至被加入細(xì)胞培養(yǎng)懸液中用于防止細(xì)胞團(tuán)結(jié)。

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優(yōu)勢(shì)：

該酶已被證實(shí)作用迅速有效又溫和；

細(xì)胞能保持完整，細(xì)胞膜無損；

該酶非哺乳動(dòng)物來源，不含支原體或動(dòng)物病毒污染；

對(duì)于溫度、pH的改變、以及血清成分都很穩(wěn)定；

使用螯合劑或稀釋就能簡單滅活；

酶活定義：

1U是在檢測條件下1分釋放相當(dāng)于1 umol酪氨酸的Folin陽性氨基酸或肽的酶量；DispaseII：≥0.8 U (37℃，使用酪蛋白作為底物，pH 7.5)；1U Dispase II基本相當(dāng)于600U日本單位的Dispase。

抑制劑： EDTA、EGTA、Hg2+、其他重金屬。血清不會(huì)抑制酶活性。

使用方法：

用Hepes-buffered saline (50 mM Hepes/KOH pH 7.4, 150 mM NaCl)溶解Dispase至10 mg/ml，使用時(shí)用細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋到0.6-2.4 U/ml。不推薦高于2.4 U/ml的 工作濃度，可用0.22 um的無菌濾膜過濾除菌。

保存方法：

保存在2-8℃；配成溶液后，在2-8℃ 2周內(nèi)使用有效，在-20°2個(gè)月內(nèi)使用有效；不要反復(fù)凍融；儲(chǔ)存液用Hepes鹽緩沖液稀釋后，2-8℃，3天內(nèi)使用有效。