ELISA試劑盒擁有穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠，是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。下面以96T的為例來(lái)給大家介紹關(guān)于ELISA試劑盒的構(gòu)成以及測(cè)定步驟：

　　試劑盒組成

　完整的ELISA試劑盒包含以下各組分：

　　(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑);

　　(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物);

　　(3)酶的底物;

　　(4)陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品(定性測(cè)定中)，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測(cè)定中);

　　(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液;

　　(6)洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水;

　　(7)酶反應(yīng)終止液，常用的HRP反應(yīng)終止液為硫酸，其濃度按加量及比色液的zui終體積而異，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

 測(cè)定步驟                            
1.加樣                            
    1. 除包被外都需45度加樣                        
    2.加樣體積要準(zhǔn)確                        
    3.管底加樣，不能加在管壁上                        
    4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡                        
2.溫浴                            
    1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后，應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。                        
    2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。                        
    3.為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋，或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。                        
    4.加入底物后，反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，以便 不時(shí)觀察，待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí)，即可終止酶反應(yīng)。                        
3.洗滌                            
    1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應(yīng)步驟，但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。                        
    2.目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。                        
4.讀板                            
    1.陰性對(duì)照顏色極淺，在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色。                        
    2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果，準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。

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