上海信帆生物代理銷售神經(jīng)肽放免檢測服務(wù)，現(xiàn)貨供應(yīng)，歡迎。

一．試劑盒的組成

1.            抗體          瓶，（每瓶加緩沖液          ml復(fù)溶）。

2．¹²⁵I        標(biāo)記物        瓶,（每瓶加緩沖液          ml復(fù)溶）。

3．           標(biāo)準(zhǔn)品25.6ng，使用時(shí)用緩沖液稀釋成每100ul分別含2.5、   

  5、10、20、40、80、160、320、640、1280pg的標(biāo)準(zhǔn)品。方法：標(biāo)準(zhǔn)品瓶內(nèi)加入2ml緩沖液充分混勻,即為每100ul含1280pg的標(biāo)準(zhǔn)品,然后吸取500ul標(biāo)準(zhǔn)液再用500ul緩沖液稀釋即為640pg濃度, 依次倍比稀釋至每100ul含 2.5pg。加樣時(shí)5、20pg兩點(diǎn)可以不做。注意每一個(gè)濃度務(wù)必充分混勻。

4．分離劑：50ml/瓶。（用前充分混勻）

5．緩沖液：50ml/瓶。

6．說明書1份。

   收到試劑盒后應(yīng)2-8℃保存。在2周內(nèi)進(jìn)行標(biāo)本測定，使用中應(yīng)避免反     

   復(fù)凍融。試劑盒NSB應(yīng)在10%以內(nèi)，B0值在30~40%之間。

二．操作步驟

1. 平衡飽和加樣程序

   多用于組織提取液中神經(jīng)肽含量的測定。以大鼠垂體、下丘腦β-EP免疫活性物質(zhì)含量測定為例。

         大鼠垂體、下丘腦β-EP含量的RIA 測定程序（總反應(yīng)體積300ul）

*標(biāo)準(zhǔn)曲線宜做2-3條，既同一濃度應(yīng)有2-3個(gè)管。

**腦組織及其它們提取液（樣品）的加樣量，應(yīng)根據(jù)各組織內(nèi)神經(jīng)肽的含                           

  量來確定加樣量?？偧訕恿坎蛔?00ul者用緩沖液補(bǔ)足。

2.  順序飽和加樣程序

    用于神經(jīng)肽含量較低的樣本，如血漿、腦脊液、推挽灌流液中神經(jīng)肽的含量測定。以人血漿AVP免疫活性物質(zhì)含量測定為例。

           人血漿AVP含量RIA測定程序（總體積500ul）

   附：無肽血漿的制備（用于血漿的直接測定）：

取4%加膜活性炭2ml離心，棄上清，加等體積血漿，充分振蕩10min，再離心(4000rpm,10min)，取上清。上清液重復(fù)離心1-2次，即為無肽血漿。血漿中的生物活性物質(zhì)被活性炭吸附而去除。血漿樣本加樣量，要在預(yù)實(shí)驗(yàn)中摸索，每次測定要有正常樣品對照。神經(jīng)肽的RIA，影響因素較多，要特別注意細(xì)心操作。

三．標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制和樣本含量的計(jì)算

    本法分離沉淀計(jì)數(shù)為結(jié)合（B）的cpm數(shù)。計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)管與zui大結(jié)合（B0）的比值（B/ B0）×100%，以不同濃度的對數(shù)值為橫坐標(biāo)，B/ B0的百分比為縱坐標(biāo)，在半對數(shù)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出所測樣本抗原（神經(jīng)肽）的含量（上述計(jì)算通?？梢杂捎?jì)算機(jī)處理），再換算成每ml血漿或每mg組織濕重或每mg蛋白某種神經(jīng)肽的含量。

如果計(jì)數(shù)器的本底較高，一定要從計(jì)算中扣出本底，一般NSB要小于10%。