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本產(chǎn)品僅供科研實驗,不得用于醫(yī)療或食用
科研用血清現(xiàn)貨供應
5. 血清保存的注意事項
血清的保存應該注意以下幾點:
(1)需要長期保存的血清必須儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中.4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月.由于血清結冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂.
(2)熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的血清.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因為熱處理會造成血清沉淀物顯著增多,而且還會影響血清的質量.補體參與反應有:細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學趨化和活化.
(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全部溶解后再分裝.在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生.切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝集而出現(xiàn)沉淀.
(4)一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌.如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清.
(5)血清中的沉淀物 絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質量.可用離心3000rpm, 5分鐘去除,也可不用處理. 顯微鏡下"小黑點":經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會顯著增多.有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認為血清受污染.一般情況下,此小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清質量,則應立即停止使用,更換另一批號的血清.
(6)切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破會而影響血清質量.
保存血清的方法
血清應保存在-5C至-2OC。然而,若存放于4C時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議將無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。
如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質量受損?
將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8C冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。
如何避免沉淀物的產(chǎn)生
1、解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-2O。C至4。C至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(如-20。C至37。C),實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
2、解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生
3、請勿將血清置于37。C太久。若在37。C放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質量。
4、血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
5、若必須做血清的熱滅活,請遵守56。C,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理? 欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。但不建議以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。
何謂熱滅活?
一般是以56C,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化,而補體所參與的反應有:溶細胞活性,平滑肌的收縮,肥大細胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和激活。
有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒立顯微鏡下觀察,像是 "小黑點",常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37C環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。